ВЫЯВЛЕНИЕ ПИГМЕНТОВ СТЕБЛЯ КАКТУСОВ
Н. Шемораков, Калужская обл.
Некоторые "цветные" формы кактусов удается выращивать на "своих корнях". Но какое количество хлорофилла они содержат в процентах от общего количества пигментов стебля? Какое минимальное количество хлорофилла необходимо для существования "цветной" формы на "своих корнях"? Описанный ниже метод дает возможность ответить на давно волнующие любителей "цветных" кактусов вопросы.
В составе пигментов стебля кактусов находятся два зеленых пигмента: хлорофилл А и хлорофилл В и два желтых: каротин и ксантофилл. Желтые пигменты легко отделить от зеленых, используя реакцию Крауса. Более трудным является метод отделения хлорофиллов. Этот метод был разработан в 1903 г. М. С. Цветом и получил название адсорбционного. Сущность его заключается в том, что различные вещества обладают неодинаковой способностью адсорбироваться. Смесь пигментов стебля кактуса, растворенная в каком-либо органическом растворителе, пропускается через определенный адсорбит, которым может быть оксид цинка ZnO, карбонат кальция CaCO3, крахмал, сахарная пудра, зубной порошок и другие. Вследствие того, что каждый пигмент обладает определенной, свойственной только ему способностью адсорбироваться на заполняющем стеклянную трубку адсорбите, происходит разделение пигментов и каждый из них концентрируется в строго определенном слое адсорбента. При разделении пигментов они распределяются в следующем порядке: хлорофилл В, хлорофилл А, ксантофилл и каротин - в самом низу хромотографической колонки.
Данный метод не отличается особой сложностью. Для исследования могут быть взяты практически любые органы растения.
Стебель без ареол (или срезанный со стебля эпидермис) массой 3 гр. нужно разрезать на мелкие ломтики, а затем растереть в чистом кварцевом песке в фарфоровой ступке до образования однородной массы. К растертой массе нужно добавить 15 мл. смеси бензина и бензола в соотношении 9:1, 10 мл. ацетона и вновь растереть смесь в ступке. Затем полученную массу нужно 15 минут настоять. Далее нужно профильтровать смесь через бумажный фильтр. Полученную после фильтрования вытяжку пигментов перелить в делительную воронку и добавить к ней 50 мл. дистиллированной воды, не взбалтывая содержимого, так как может образоваться стойкая эмульсия. Промывание повторить несколько раз. Можно вести промывание не в делительной воронке, а в химическом стакане подходящего объема (300 - 500 мл.). После отмывания примесей вытяжку пигментов нужно перелить в колбу и добавить 2 - 3 гр. Прокаленного мела (СaCO3 ). Через 15 минут 10 - 15 мл. смеси пигментов осторожно сливается в хромотографическую колонку, где и происходит их разделение. При этом получается первичная хромотограмма.
Хромотографическая колонка представляет собой стеклянную трубку диаметром около 2 см. и длиной около 20 см., укрепленную вертикально в штативе. В нижней части трубки находится очень плотный ватный тампон, а поверх него, примерно до половины объема трубки, насыпан адсорбит. Происходит постепенное обособление зон вверху колонки. Сначала идет зона смеси пигментов, ниже располагается желто-зеленая зона хлорофилла В, затем сине-зеленая зона хлорофилла А, еще ниже - зона желтого пигмента ксантофилла, а еще ниже зона оранжевого пигмента - каротина. Чаще всего каротин собирается в самом низу колонки, на вате. При дальнейшем отмывании адсорбита бензином можно получить все пигменты в отдельности.
По ширине слоев разделившихся пигментов в хромотографической колонке можно судить об их численном соотношении в стебле любого кактуса (в том числе и любой "цветной" формы). Для измерения слоев можно воспользоваться обычной школьной линейкой.
В одних и тех же "цветных" формах кактусов соотношение пигментов могут быть различными в разные времена года, на разных подвоях, при различной интенсивности освещения и т.д. Все это представляет определенный интерес и обширную почву для исследования.